真菌毒素是真菌在適宜條件下產生的有毒次級代謝產物,能夠引發人類、動物各種急、慢性疾病主要威脅人類健康的真菌毒素種類有單端孢霉烯族類毒素、伏馬類毒素、赭曲霉類毒素等。目前,大部分的國家和地區都制定了糧食中真菌毒素*,我國也高度重視真菌毒素污染問題,在2015年新修訂的《食品安全法》中,將生物毒素明確列入重點關注的污染物質中。我國也已經制定了糧食中嘔吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(EN)、赭曲霉毒素(OTA)四種真菌毒素*,新的毒素*也在逐步制定完善中。據報道我國每年有3100萬噸糧食在生產、儲存、運輸過程中被真菌污染,約占糧食年總產量的6.2%。為了保證我國糧食質量安全,避免不必要的經濟損失,及時快速監測調查真菌毒素污染種類、水平及其風險尤為重要。
由于真菌毒素種類多樣,且存在協同污染,為確保全面、快速的了解糧食中真菌毒素的污染情況,迫切需要一種簡單、快速、靈敏、同時準確測定糧食中多種真菌毒素的方法。目前真菌毒素的檢測方法主要有薄層色譜法、酶聯免疫吸附法、液相色譜法、液相色譜串聯質譜法。薄層色譜法程序復雜、可重復性和再現性差,基于抗原抗體相互作用的酶聯免疫吸附法雖有較高的選擇性,但無法準確定量,同時由于前處理簡單,沒有有效的凈化,易受基質干擾,產生假陽性。
本文使用賽默飛液相色譜儀Dionex Ultimate 3000和三重四極桿質譜儀TSQ Endura MS/MS聯用測定16 種真菌毒素的方法。該方法在16 min 內完成16 種常見真菌毒素的分離。
儀器條件
色譜條件
色譜柱:Thermo Scientific Hypersil Gold aQ 100 x 2.1 mm, 1.9 µm
貨號 25302-102130
流動相:
A: 5 mM NH4Ac + 0.5% acetic acid in water
B: 5 mM NH4Ac + 0.5% acetic acid in methanol
進樣量:10μL/ 20μL
流速:400μL/min
質譜條件
Ion Source type: HESI
Detection Mode: t-SRM
Spray voltage positive: 3500 V
Spray voltage negative: 2500 V
Sheath gas: 45
Aux gas: 15
Sweep gas: 1
Ion transfer tube (T): 340 °C
Vaporizer (T): 350 °C
結論
本文采用液質連用法測定糧食中16種重要真菌毒素,涵蓋目前國內外已設定*的真菌毒素。使用Hypersil Gold aQ 100 x 2.1 mm, 1.9 µm色譜柱進行分析,16min內對16種真菌毒素完成分離,峰型對稱,分析速度快,靈敏度高,重現性好。
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